饲料中磺胺喹恶啉的测定高效液相色谱法

                                                           GBT 8381.10-2005

1 本标准规定了以GE-200高效液相色谱(HPLC)仪测定饲料中磺胺喳唔琳的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中磺胺喳唔琳的测定，最小检测浓度为5.0 mg/kg.

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误内容)或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

3 原理

用甲醇水溶液提取饲料中的磺胺喳嗯琳，离心，过滤，在HPLC仪上分离测定。

4 试荆和溶液

以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂；水为蒸馏水，色谱用水符合GB/T 6682一级水的规定。

4. 1 磺胺唾嗯琳标准品:含磺胺唆唔琳(G14HUN402S) 95-0%-

4.2 甲醇:色谱纯。

4.3 磷酸盐溶液:取磷酸二氢钾3.4 0g 和磷酸氢二钾5.7 1g ，加水溶解并稀释至10 00m L

4.4 磺胺喳唔琳标准溶液:准确称取磺胺喳唔琳(4.1)50 mg,溶于甲醇并稀释成。. 1 mg/ mL的储备液，置4℃冰箱中避光保存。有效期1个月。临用前，取此储备液用水稀释成适当浓度的标准工作液。

4.5 提取液:甲醇100 mL+水50 mLo

5 仪器

5. 1实验室常用仪器设备。

5.2GE-200高效液相色谱仪(配GE-200紫外检测器)。

5.3分析天平:感量为。.00 01 g 和。.001g o

5.4旋涡振荡器。

5.5离心机:4 000 r/mine

5.6针头过滤器:备孔径为0. 45 um微孔滤膜。

6 试样的制备

按GB/T 14699.1规定方法采样，选取有代表性的饲料样品，至少500g ，四分法缩减至100g ，磨碎，通过。0.45 mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光低温保存备用。

7 分析步骤

7.1 提取

称取5g试样，精确至0.0 01g ，加人提取液(4.5 )50 m L，旋涡振荡器混匀，超声水浴中提取15min,中间取出摇动1次，然后以4 000 r/min离心5 min,静置，取上清液过0.45 pm滤膜，供液相色谱测定。

7.2 标准曲线的制备

准确吸取储备液适量，用水或流动相稀释成浓度分别为。0.10,0.50,1.00,2.00,10.00ug/m L的磺胺咬唔琳标准溶液，作出标准曲线。

7.3 测定

7.3. 1 色谱条件

色谱柱:C18柱，柱长150m m，柱内径4.6m m,粒度5m，或VertexC18色谱柱，4.6*150，5um。

流动相:磷酸盐溶液75ml+甲醇25ml，用前过0.45u m滤膜，并超声脱气。

流速: 1 ml/min,

检测波长:240nm.

进样量:10ul-20ul

7.3.2 定性与定f方法

根据标准品色谱的保留时间定性，定量由标准曲线或单点校准。

7.4 结果的计算和表述

试样中磺胺峰PAR,琳的含量按式(1)计算:

X=m1/m*n (1)

式中:

X一试样中磺胺唆嗯琳的含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

M1一色谱峰面积对应的磺胺喳唔琳的质量，单位为微克(ug) ;

n— 稀释倍数;

m—试样的质量，单位为克(g)。

平行测定结果用算术平均值表示，保留至小数点后1位

重复性

在同一实验室，由同一操作人员使用同一台仪器完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于10% ,