Luc细胞标记服务-细胞株/菌种-试剂-生物在线
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Luc细胞标记服务

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产品名称: Luc细胞标记服务

英文名称: Luc

产品编号: 0006

产品价格: 0

产品产地: 中国

品牌商标: 启达生物

更新时间: 2024-12-25T08:44:02

使用范围: null

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荧光素酶报告基因系统,是以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统, 测定酶与底物反应过程中释放的生物荧光反映酶生物活性。萤火虫荧光素酶基因作为报告基因,用于指示不同处理条件下基因的表达情况。

萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)大小为 61 KDa,单亚基蛋白,能够催化荧光素

(luciferin)氧化,生成氧化荧光素 oxyluciferin; 

萤火虫萤光素酶催化 luciferin 发光的最强发光波长为 560 nm。

通常将目的基因的 5UTR 或者启动子克隆至 Firefly Luciferase 的上游,或者 3UTR 或预期 RNAi 靶向序列克隆至 Firefly Luciferase 的下游,通过检测萤火虫荧光素酶与底 物的反应活性来检测启动子或者调控元件的转录调控作用。Renilla Luciferase 作为内参 来消除细胞数量或者转染效率等实验组间差异。



1.细胞铺板,转染时细胞密度:一般来说,当细胞密度达到60%~80%时进行转染可以取得较高的 转染效率。但不同细胞的最适转染密度都不尽相同,因此建议在初次转染某种细胞时,可以通过预实验先确认该细胞最佳的转染密度。

2. 转染 根据效率评价,扩大体系进行相对应的转染 例:12 孔板,体系 500 μL


3. 裂解细胞

待转染至相应的时间后,弃培养液,PBS洗一次,将细胞裂解液完全覆盖细胞充分混 匀,按以下方式加入细胞裂解液,充分裂解细胞,约 30 min~1 h



4. 荧光检测

1)取 100 μL 细胞裂解液,加至酶标板中。按照实验需要,可设置 3 孔-5 孔重复;

2)加入 5 μL 萤火虫荧光素酶反应液,震板混匀,检测萤火虫荧光素酶的活力,检测 尽量在 30 min 内完成。

5)分析数据。 注:因酶在不同细胞表达量有所不同,故底物量依不同细胞有所差异,优化区间可参考 5-20 μL。