简介：
定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。
我公司引进美国应用生物系统公司的7300型实时荧光定量PCR仪是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。7300将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可以动态观察PCR每一循环各反应管中PCR扩增产物逐渐增加的情况。PCR实验结束后可以马上得到定量结果，无需凝胶电泳分析，无需纯化PCR产物，无需进行任何实验操作。7300型实时荧光定量PCR系统采用96孔反应板或单个及8联管，反应体积25-100微升，实验可以在不到2小时内结束。与其他人工基因定量分析方法如Northern blotting or RNase-protection assays相比，7300型实时荧光定量PCR系统具有时间省，灵敏度高，准确性好和线性范围宽等优点。
技术应用：
1. DNA 或RNA 的绝对定量分析：包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测等
2. 基因表达差异分析：例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等 )，特定基因在不同时期的相对表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证
3. 基因分型：例如SNP 检测，甲基化检测等
服务内容：
我公司提供Realtime－PCR实验服务包括 TaqMan荧光探针法和SYBR Green荧光染料法，及引物设计、标准品的制作、样品提取、RT-PCR。
SYBR Green荧光染料法：
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
SYBR Green荧光染料法适用：
（1）灵敏度高：使用SYBR可使荧光效果增强到1000倍以上
（2）通用性好,不需要设计探针,方法简便,省时,价格低廉。
（3）通用型方法，在国内外科研中普遍使用。
（4）高通量大规模的定量PCR检测
（5）专一性要求不高的定量PCR检测。
TaqMan荧光探针法：
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的
TaqMan荧光探针法适用：
（1）具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重复性好，特异性更高。
（2）适用于扩增序列专一的体系的检测。
（3）样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。
（4）靶基因的特异序列较短，无论怎样优化引物设计条件都不能解决。
（5）存在与靶基因同源的序列，在PCR中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量。
（6）广泛用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物制品的鉴定。
服务流程：
1、签订服务合同：由公司专业技术员与您就具体的实验情况进行沟通，确定实验方案并签订委托服务协议。
2、设计引物：根据客户提供的目的基因及物种信息，设计、合成特异的引物和探针。并根据客户的具体研究情况选择适宜的内参基因。
3、样品处理：
A、客户提供组织、细胞，公司提取RNA并进行RNA的电泳检测。
B、客户提供RNA，公司直接进行电泳检测。
C、客户提供cDNA，公司进行内参基因的PCR检测。
4、Realtime－PCR实验：
A、RNA进行逆转成cDNA
B、利用合成的引物进行普通PCR预实验，选择只有扩增出一条特异条带的引物进行定量PCR
C、构建标准品，建立标准曲线
D、利用ABI公司提供的进口原装试剂盒在ABI7300仪器上进行Realtime－PCR 实验。
5、实验报告：包括样品质检报告、实验数据分析、实验方法及样品的PCR扩增曲线，溶解曲线和标准曲线。
我公司还提供以下服务：