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如何选择正确内参抗体,这些你需知道

作者:北京博奥森生物技术有限公司 2020-03-13T13:30 (访问量:5171)

内参抗体可用于评价蛋白质免疫印迹法(Western Blot)的效率,比较凝胶中每孔的蛋白上样量。此类对照可帮助确定样品间表达水平的差异,以判断是由细胞裂解物的实际蛋白水平导致,还是由上样量的差异导致。
内参抗体在目标蛋白的免疫荧光研究中,也可以作为共染的阳性对照。内参抗体分为未标记型和标记型,标记物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。

内参抗体种类很多,比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、Lamin B、PCNA等,其选择常使我们困惑。本文将简单介绍选择内参抗体应遵循的五项原则:

一、样本种属来源:

首先要考虑实验样本来源于什么物种。

1. 哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。

2. 植物来源实验样本,则可以选择plant actin、Rubisco等。

3. 其他来源样本研究较少,所以就应该参照文献报导,选择合适的蛋白作为内参。

二、分子量大小:

选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小,一般保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。例如,目的蛋白分子量为40KD,此时不适宜选择β-actinGAPDH作为内参,可以考虑选择α-Tubulin或者β-tubulin作为内参。

三、表达水平

选择的内参蛋白需要在待测样本中是高表达的。常用的内参蛋白是由管家基因高表达的,是细胞发育和维持细胞活力所必须的。例如,细胞核的内参蛋白 PCNA,在 DNA S 期表达,因此对于非增殖细胞不推荐使用。

四、目的蛋白表达定位

适用范围 名称 货号 分子量
胞质
beta I Tubulin bsm-33041M 50kDa
beta Tubulin bsm-33034M 50kDa
bs-4511R 50kDa
beta Actin bsm-33036M 42kDa
bs-0061R 42kDa
GAPDH bs-10900R 36kDa
bs-2188R 36kDa
bsm-0978M 36kDa
bsm-33033M 36kDa

alpha Tubunlin

bs-20496R 50kDa
bs-0159R 50kDa
Vinculin bsm-54148R 117kDa
Cyclophilin B bsm-33228M 20kDa
bsm-52473R 20kDa
核蛋白
Histone H3 bs-0349R 15-17kDa
bsm-33042M 15-17kDa
Lamin B bs-23709R 66-72kDa
bsm-33040M 66-72kDa
PCNA bs-0754R 36kDa
bsm-52347R 36kDa
bsm-33035M 36kDa
TATA binding protein TBP/TBP bsm-33227M 38kDa
YY1 bsm-52349R 46kDa
HDAC1 bs-1414R 65kDa
bsm-52080R 65kDa
膜蛋白
ATPase Na+/ K+ beta 2 (ATPB2) bs-1152R 33kDa

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