其他实验结果

· 表达GmSALT3全长使大肠杆菌中K⁺含量增加，GmSALT3-YFP、GmSALT3_TM10、AtKAT1和AtCHX20的表达也增加。

· GmSALT3-YFP在卵母细胞中定位到PM。

· 双电极电压钳电生理学显示，在ND96培养基中培养时，注入GmSALT3的卵母细胞的静息膜电位与注入H₂O的卵母细胞相比更正，但没有发现一致的电流差异，这表明通过GmSALT3的运输可能是电中性的。

· 与注射H₂O的卵母细胞相比，注射GmSALT3的卵母细胞含有更多的K⁺、Na⁺和Cl^-。

· GmSALT3会影响K⁺、Na⁺和Cl^-在卵母细胞中跨PM的运输。

· 使用100 mM NaCl处理发现，NIL-S地上部分、茎和叶中的Cl^-、K⁺含量更高，K⁺/Na⁺比却降低了，NIL-T叶片中的K⁺/Na⁺比在胁迫第3 d后才明显升高。

· 盐处理10 d后，NIL-T的根、茎、叶干重明显增加。

· 100 mM NaCl处理4 d后发现，Na⁺、Cl^-在NIL-S的所有气生组织中积累得更多。

· 在根部（主根和侧根），NIL-T比NIL-S积累的Cl^-多。

· 100 mM NaCl处理4 d后，检测大豆茎韧皮部和木质部汁液中的离子浓度。与NIL-T相比，NIL-S的木质部汁液中的Na⁺浓度明显更高。与叶片的数据相反，NIL-S的木质部和韧皮部汁液中的Cl^-浓度比NIL-T低。

· 对交互嫁接和自嫁接（self-grafted，对照）的植株进行100 mM NaCl处理8 d，结果发现在NIL-S砧木上嫁接NIL-T接穗，叶片Cl^-含量比自嫁接NIL-S低。相反，当NIL-S接穗嫁接到NIL-T砧木上时，叶片中Cl^-含量与自嫁接NIL-S相比差异不显著。与自接NIL-T植株相比，自接NIL-S植株的Cl^-含量要高得多。

· TEM（透射电子显微镜）成像观察NIL-T和NIL-S韧皮部的超微结构，发现盐处理后的NIL-T和NIL-S在根系韧皮部细胞中的形态没有差异差异，表明缺乏全长GmSALT3不会破坏亚细胞形态，离子流速的变化更可能是GmSALT3诱导排盐的直接原因。

结论
综上所述，本工作对GmSALT3在植物体内和异源系统中的耐盐机制提供了进一步的认识。研究认为，在NIL-T中，全长GmSALT3通过限制Na⁺在木质部的装载介导Na⁺和Cl^-从地上部分排出，而Cl^-则通过韧皮部从地上部分重新转移回根。这是第一次发现一种蛋白质能促进植物韧皮部的Cl^-再循环，并使植物具有更好的耐盐性。本研究的数据还表明，GmSALT3是一个具有运输能力的内膜定位蛋白，但还不能说明GmSALT3通过不同细胞类型来改变不同转运过程的确切的细胞机制，这需要进一步研究。利用NIL-T和NIL-S植物进行RNA测序，可能有助于研究GmSALT3是否通过影响转录而赋予大豆耐盐性，以及在盐胁迫条件下， NIL-T和NIL-S的根部有哪些独特的途径和基因可能发生明显变化。

测试液

5 mM NaCl, 0.2 mM KCl, 0.2 mM CaCl₂, 5 mM HEPES, pH 7.5

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/pce.13947

关键词：盐耐受；非生物胁迫；大豆；GmSALT3；CHX；离子转运体；地上部分外排