多酚氧化酶(PPO）测试盒
品牌：Solarbio | 货号：BC0190
- 检测方法 : 可见分光光度法
| 商品货号： | 商品品牌： | 规格 | 基本售价： | 选择规格 |
|---|---|---|---|---|
| BC0190-50管/24样 | Solarbio | 50管/24样 | 760.00元 |
测定意义：PPO（EC1.10.3.1）主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
测定原理：PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在525nm有特征光吸收。
需要的仪器，耗材:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容：
提取液：液体，60ml×1 瓶，4℃保存，用前混匀；
试剂一：液体，40ml×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体，10ml×1 瓶，4℃保存；
操作步骤：
一、 粗酶液提取 ：
1. 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 200 万细菌或细胞加入 400μl 提取液，超
声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次） ；8000g 4℃离心 10 分钟，
取上清，置冰上待测。
2. 称取约 0.2g 组织，加入 1ml 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待
测。
二、 测定操作表：
冷却后，5000g，常温离心 10min，收集上清，用蒸馏水调零，410nm 处检测测定管和对照管吸
光度。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进
行 1min 沸水浴处理
PPO 活 性 计算：
1、组织中 PPO 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每分钟每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶
活力单位。
PPO （U/mg prot） = V 反总×V 样总÷V 样÷T÷0.01× （A 测定-A 对照） ÷Cpr=60× （A 测定-A 对照） ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每分钟每 g 组织蛋白在每 ml 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活
力单位。
PPO（U/g 鲜重）= V 反总×V 样总÷V 样÷T÷0.01×（A 测定-A 对照）÷W=60×（A 测定-A 对照）÷W
2、细菌或培养细胞中 PPO 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每分钟每 mg 组织蛋白在每 ml 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶
活力单位。
PPO （U/mg prot） = V 反总×V 样总÷V 样÷T÷0.01× （A 测定-A 对照） ÷Cpr=60× （A 测定-A 对照） ÷Cpr
（2）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 ml 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一
个酶活力单位。
PPO（U/10 4 cell）= V 反总×V 样总÷V 样÷T÷0.01×（A 测定-A 对照）÷细菌或细胞密度（10 4 /mL）
=60× （A 测定-A 对照） ÷细菌或细胞密度 （10 4 /mL） =60× （A 测定-A 对照） ÷细菌或细胞密度 （10 4 /mL）
V 反总：反应体系总体积，0.9mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.15 mL；V 样总：加入提取
液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，0.2g.
注意事项：不同样本的多酚氧化酶最佳的反应温度略有差别，可在 25-37℃之间进行调节。