毕赤酵母细胞应用及其残留蛋白（HCP）质控

毕赤酵母是第二代酵母表达系统，能够将甲醇作为唯一碳源，是近年来被公认的最有效的外源蛋白表达系统之一，已有多种外源蛋白在该宿主系统中获得了成功表达。作为生产外源蛋白的重要宿主菌，依靠其各种不同功能的表达载体，得到广泛应用，表达的蛋白质包括酶、膜蛋白、抗原、抗体和调节蛋白等。

毕赤酵母表达系统在多个领域中都有广泛的应用。其中，医药领域是应用最广泛的领域之一。首先，毕赤酵母表达系统可用于生产各种重组蛋白药物，目前该表达系统已有15种被FDA批准上市的蛋白质药物，如Cervarix疫苗、细胞因子 IFN-γ、GM-CSF 等。这些药物又广泛用于预防与治疗肿瘤、炎症、自身免疫病等疾病；其次，毕赤酵母表达系统也可用于酶工业生产。由于毕赤酵母菌株具有高效的蛋白质分泌能力，所以毕赤酵母表达系统广泛应用于工业发酵中，尤其是酶制剂的生产中。尽管在毕赤酵母在生产过程中已有残留蛋白的去除工艺，但疫苗产品中仍有可能残留HCP。所以毕赤酵母HCP检测项目是生物制品生产工艺中重要的质量检测指标之一。

残留蛋白风险及法规监管要求

使用毕赤酵母生产上述生物制品时，必须高度纯化。尽管如此，这些产品的制造和纯化过程还是会不可避免的留下毕赤酵母宿主细胞残留蛋白杂质。这些杂质可导致不良的毒性或免疫反应，因此最好将宿主细胞的杂质降低到实际使用的最低水平。各国法规都有涉及HCP的论述，要求必须对生物药品进行分析和纯化，以将宿主细胞蛋白HCP降低到可接受的水平。

《中国药典》三部（2020版）各论中显示，HCP标准为占总蛋白含量要小于0.05%（相当于小于500ppm）；

美国药典USP<1132>章节规定：用一种灵敏度较高的方法检测药品中的HCP，其含量应该低于检测限（通常小于100ppm，即1mg总蛋白中HCP含量应小于100ng，也即<0.01%）；

欧洲药典EP 2.6.34中规定：在生物制品中，HCP的含量应当小于0.1%；

国际人用药品注册技术协调会（ICH）指南：ICH Q6B指出，需要根据ICH准则采用敏感且经过验证的有效方法来监控残留的HCP，其残留量通常要求小于100ppm。

残留蛋白（HCP）检测方法

酶联免疫吸附法（ELISA）是目前HCP检测最常用的方法，在2020版《中国药典》通则3412/3413/3414中提到的宿主蛋白残留检测方法均为ELISA法。

美国药典USP<1132>章节中也提到可采用电泳法、ELISA和LC-MS/MS等方法检测HCP含量，且由于ELISA法操作简便、快速、高灵敏、高通量等特点，而被推荐为HCP检测的首选方法。

翌圣生物依托相关法规，从市场需求出发，自主研发了毕赤酵母宿主细胞蛋白（HCP）残留量检测试剂盒。试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）的实验原理，以及生物素-链霉亲和素放大系统，能够高灵敏的检测样本中HCP残留量。试剂盒可以用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。

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产品资质

符合法规：按照Chp、USP、ICHQ2（R2）等要求进行全面验证，性能符合中外法规标准；

配合审计：产品生产符合ISO13485质量体系标准，有完善的审计文件；

保障品质：试剂盒所需抗原抗体等原材料全自产，供货稳定。

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产品特点

检测范围宽：试剂盒线性范围为3.125 ng/mL~200 ng/mL；

准确度高：稀释线性好，且样本加标回收率在80~120%之间；

灵敏度高：定量下限(LLOQ)分别为1.5ng/mL，检测下限(LLOD)分别为0.5ng/mL；

精密度高：批内重复性高CV＜10%，批间差异小即中间精密度CV＜15%。

产品信息

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